cromatografia liquida ad alte prestazioni ( HPLC) è un metodo comune di analisi di laboratorio in cui un campione viene separato nei suoi costituenti chimici come è passa attraverso una colonna . La colonna viene riempita con un imballo poroso tipicamente basate su gel di silice trattata. Una colonna standard di fase inversa , come ad esempio un C8 , a volte può diventare intasato o contaminato . Tali colonne possono spesso essere rigenerato con alcune tecniche semplici . Cose che ti serviranno
HPLC strumento
Acqua Foto Metanolo
acetonitrile
isopropanolo
Cloruro di metilene
esano
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rigeneranti di una colonna
1
Staccare la colonna Causato e invertire la sua posizione , in modo che la fase mobile sta entrando in quello che è normalmente l'uscita della colonna . Accoppiare una linea uscita all'altra estremità della colonna (l'estremità che era originariamente dell'ingresso) , ed eseguire questo in un contenitore per rifiuti .
2
pompa attraverso una serie di solventi in ordine decrescente di polarità . Una serie di base consigliata è di iniziare con metanolo , poi progredire attraverso acetonitrile , acetonitrile /isopropanolo ( 75:25 ) , isopropanolo , cloruro di metilene ed esano . Se la fase mobile originariamente seduto nella colonna era un tampone , un lavaggio con acqua dovrebbe precedere il metanolo . Una velocità di flusso di 1 a 2 millilitri al minuto è tipicamente adatto , e circa 10 volumi di colonna di ciascuna solventi deve essere pompato attraverso . Il volume della colonna è lo spazio interno non occupato da imballaggio ed è calcolato come ( 0,7 x pi x ( ID /2 ) x ^ 2 L ) , dove ID è diametro interno della colonna e L è la sua lunghezza .
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3
Pompa altri 10 volumi di colonna di isopropanolo attraverso la colonna di prepararlo per l'uso con la fase mobile originale . Se la fase mobile originale è stato tamponato , anche pompare acqua attraverso la colonna dopo l' isopropanolo prima di tornare alla fase mobile tamponata originale .
4
disinserire la colonna e di invertire e ricollegarlo in modo che sia nella sua configurazione normale ( cioè con la fase mobile viene pompato nel ingresso della colonna ) . Ricollegare l' uscita della colonna al rivelatore .
